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36种微生物实验常用的培养基配制方法
      
  1.牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)
  牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.4~7.6。
  2.高氏1号培养基(用于放线菌培养)
  可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HPO4?3H2O 0.5g,MgSO4?7H2O0.5g,FeSO4?7H2O0.01g,水1000mL,pH7.4~7.6。配制时注意:可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
  3.马丁氏(Martin)培养基(用于从土壤中分离真菌)
  K2HPO41g,MgSO4?7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,1/3000孟加拉红水溶液100mL,水900mL,自然pH,121℃湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55~60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。
  4.马铃薯培养基(PDA培养基)(用于霉菌或酵母菌培养)
  马铃薯(去皮)200g,蔗糖(或葡萄糖)20g,水1000mL,配制方法如下:
  将马铃署去皮,切成约2cm2的小块,放入1500mL的烧杯中煮沸30min,注意用玻棒搅拌以防糊底,然后用双层纱布过滤,取其滤液加糖,再补足至1000mL,自然pH,霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。
  5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养)
  蔗糖30g,NaNO3 2g,K2HPO4 1g,MgSO4?7H2O0.5g,KCl 0.5g,FeSO4?7H2O0.1g,水1000mL,pH7.0~7.2。
  6.Hayflik培养基(用于支原体培养)
  牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂15g,pH7.8~8.0,分装每瓶70mL,121℃湿热灭菌15min,待冷却至80℃左右,每70mL中加入马血清20mL,25%鲜酵母浸出液10mL,15醋酸铊水溶液2.5mL,青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL,以上混合后倾注平板。
  *注意:醋酸铊是极毒的药品,需特别注意安全操作。
  7.麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基)
  葡萄糖0.1g, KCl 0.18g,酵母膏0.25g,醋酸钠0.82g,琼脂l.5g,蒸馏水l00mL。溶解后分装试管,1l5℃湿热灭菌15min。
  8.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P.反应和甲基红试验)
  蛋白胨0.5g,葡萄糖0.5g,K2HPO4 0.2g,水100mL,pH7.2,1l5℃湿热灭菌20min。
  9.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验)
  蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.2~7.4,121℃湿热灭菌20min。
  10.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验)
  蛋白胨0.2g,NaCl 0.5g,K2HPO4 0.02g,水100mL,溴麝香草酚蓝(1%水溶液)0.3mL,糖类lg。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中,调pH至7.4,再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇溶解后,再加水配成1%水溶液),加入糖类,分装试管,装量4~5cm高,并倒放入一杜氏小管(管口向下,管内充满培养液)。115℃湿热灭菌20min。灭菌时注意适当延长煮沸时间,尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类,如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等(后两种糖的用量常加大为1.5%)。
  11.RCM培养基(强化梭菌培养基)、(用于厌氧菌培养)
  酵母膏3g,牛肉膏l0g,蛋白胨10g,可溶性淀粉lg,葡萄糖5g, 半胱氨酸盐酸盐0.5g,NaCl 3g,NaAc 3g,水l000mL,pH8.5,刃天青3mg/L,l2l℃湿热灭菌30min。
  12.TYA培养基(用于厌氧菌培养)
  葡萄糖40g,牛肉膏2g,酵母膏2g,胰蛋白胨(bacto-typetone)6g,醋酸铵3g,KH2PO4 0.5g,MgSO4?7H2O0.2g,FeSO4?7H2O0.01g,水1000mL, pH6.5,121℃湿热灭菌30min。
  13.玉米醪培养基(用于厌氧菌培养)
  玉米粉65g,自来水1000mL,混匀,煮10min成糊状,自然pH,121℃湿热灭菌30min。
  14.中性红培养基(用于厌氧菌培养)
  葡萄糖40g,胰蛋白胨6g,酵母膏2g,牛肉膏2g,醋酸铵3g,KH2PO4 5g,中性红0.2g,MgSO4?7H2O0.2g,FeSO4?7H2O0.01g, 水1000mL,pH6.2,121℃湿热灭菌30min。
  15.CaCO3明胶麦芽汁培养基(用于厌氧菌培养)
  麦芽汁(6波美)1000mL,水1000mL,CaCO310g,明胶10g,pH6.8,121℃湿热灭菌30min。
  16.BCG牛乳培养基(用于乳酸发酵)
  (A)溶液:
  脱脂乳粉100g,水500mL,加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1mL,80℃灭菌20min。
  (B)溶液:
  酵母膏10g,水500mL,琼脂20g, pH6.8,121℃湿热灭菌20min。以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。
  17.乳酸菌培养基(用于乳酸发酵)
  牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5g,NaCl 5g,水1000mL,pH6.8,121℃湿热灭菌20min。
  18.酒精发酵培养基(用于酒精发酵)
  蔗糖10g,MgSO4?7H2O 0.5g,NH4NO30.5g,20%豆芽汁2mL,KH2PO4 0.5g,水100mL,自然pH。
  19.柯索夫培养基(用于钩端螺旋体培养)
  优质蛋白胨0.4g, NaCl 0.7g,KCl 0.02g, NaHCO3 0.01g,CaCl 0.02g,KH2PO40.09g,NaH2PO40.48g,蒸馏水500mL,无菌兔血清40mL。
  制法:
  除兔血清外的其余各成分混合,加热溶解,调pH至7.2,121℃湿热灭菌20min,待冷却后,加入无菌兔血清,制成8%血清溶液,然后分装试管(5~10mL/管),56℃水浴灭活lh后备用。
  20.豆芽汁培养基
  黄豆芽500g,加水1000mL,煮沸lh,过滤后补足水分,121℃湿热灭菌后存放备用,此即为50%的豆芽汁;
  用于细菌培养:
  10%豆芽汁200mL,葡萄糖(或蔗糖)50g,水800mL,pH7.2~7.4。
  用于霉菌或酵母菌培养:
  10%豆芽汁200mL,糖50g,水800mL,自然pH。霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。
  21.LB(Luria—Bertani)培养基(细菌培养,常在分子生物学中应用)
  双蒸馏水950mL,胰蛋白胨l0g,NaCl l0g,酵母提取物(bacto- yeast extract)5g,用lmol/L NaOH (约l mL) 调节pH值至7.0,加双蒸馏水至总体积为1L,121℃湿热灭菌30min。
  含氨苄青霉素LB培养基:
  待LB培养基灭菌后冷至50℃左右加入抗生素,至终浓度为80~100mg/L。
  22.复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基)、(用于水体中大肠菌群测定)蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,琼脂20g,乳糖10g,K2HPO40.5g,无水亚硫酸钠5g,5%碱性复红乙醇溶液20mL,蒸馏水1000mL。
  制作过程:
  先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL水中,加热溶解,再加入K2PO4,溶解后补充水至l000mL,调pH至7.2~7.4。随后加入乳糖,混匀溶解后,于115℃湿热灭菌20min。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中,用少许无菌水使其溶解,在水浴中煮沸10min后,立即滴加于20mL 5%碱性复红乙醇溶液中,直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中,混匀后立即倒平板,待凝固后存放冰箱备用,若颜色由淡红变为深红,则不能再用。
  23.乳糖蛋白胨半固体培养基(用于水体中大肠菌群测定)
  蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母膏5g,乳糖10g,琼脂5g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.4,分装试管(l0mL/管),115℃湿热灭菌20min。
  24.乳糖蛋白胨培养液(用于多管发酵法检测水体中大肠菌群)
  蛋白胨10g,牛肉膏3g,乳糖5g,NaCl 5g,蒸馏水l000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。调pH至7.2,分装试管(l0mL/管),并放入倒置杜氏小管,l15℃湿热灭菌20min。
  25.三倍浓乳糖蛋白胨培养液(用于水体中大肠菌群测定)
  将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大3倍加入到l000mL水中,制法同上,分装于放有倒置杜氏小管的试管中,每管5mL,1l5℃湿热灭菌20min。
  26.伊红美蓝培养基(EMB培养基)(用于水体中大肠菌群测定和细菌转导)
  蛋白胨l0g,乳糖10g,K2HPO4 2g,琼脂25g,2%/伊红Y(曙红)水溶液20mL,0.5%美蓝(亚甲蓝)水溶液l3mL,pH7.4。
  制作过程:
  先将蛋白胨、乳糖、K2HPO4和琼脂混匀,加热溶解后,调pH至7.4,1l5℃湿热灭菌20min,然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液,充分混匀,防止产生气泡。待培养基冷却到50℃左右倒平皿。如培养基太热会产生过多的凝集水,可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖,其余成分不变。
  27.加倍肉汤培养基(用于细菌转导)
  牛肉膏6g,蛋白胨20g,NaCl 10g,水1000mL,pH7.4~7.6。
  28.半固体素琼脂(用于细菌转导)琼脂1g,水100mL,121℃湿热灭菌30min。
  29.豆饼斜面培养基(用于产蛋白酶霉菌菌株筛选)
  豆饼100g加水5~6倍,煮出滤汁100mL,汁内加入KH2PO4 0.1%,MgSO4 0.05%,(NH4)2SO4  0.05%,可溶性淀粉2%,pH6,琼脂2%~2.5%。
  30.酪素培养基(用于蛋白酶菌株筛选)
  分别配制A液和B液。
  A液:
  称取Na2HPO4?7H2O 1.07g。干酪素4g,加适量蒸馏水,并加热溶解。
  B液:
  称取 KH2PO4 0.36g,加水溶解。A、B液混合后,加入酪素水解液0.3 mL,加琼脂20g,最后用蒸馏水定容至1000mL。
  酪素水解液的配制:
  1g酪蛋白溶于碱性缓冲液中,加入1%的枯草芽孢杆菌蛋白酶25mL加水至100mL,30℃水解l h。用于配制培养基时,其用量为1000mL,培养基中加入100mL以上水解液。
  31.细菌基本培养基(用于筛选营养缺陷型)
  Na2HPO4?7H2O 1g,MgSO4?7H2O0.2g,葡萄糖5g,NaCl 5g,K2HPO4lg,水l000mL,pH7.0,1l5℃湿热灭菌30min。
  32.YEPD培养基(用于酵母原生质体融合)
  酵母粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,蒸馏水1000mL,pH6.0,115℃湿热灭菌20min。
  33.YEPD高渗培养基(用于酵母原生质体融合)
  在YEPD培养基中加入0.6mol/L的NaCL,3%琼脂。
  34.YNB基本培养基(用于酵母原生质体融合)
  0.67%酵母氮碱基(YNB, 不含氨基酸,Difco),2%葡萄糖,3%琼脂,pH6.2。
  另一配方为:
  葡萄糖10g(NH4)2SO4 1g,K2HPO40.125g,KHPO4 0.875g,KI 0.0001g,MgSO4?7H2O0.5g,CaCl2?2H2O0.lg,NaCl0.1g,维量元素母液lmL,维生素母液lmL(母液均按常规配制),水1000mL,pH5.8~6.0。
  35.YNB高渗基本培养基(用于原生质体融合)
  在YNB基本培养基中加入0.6mol/LNaCl。
  36.酚红半固体柱状培养基(用于检查氧与菌生长的关系)
  蛋白胨1g,葡萄糖10g, 玉米浆10g,琼脂7g,水1000mL,pH7.2。在调好pH后,加入1.6%酚红溶液数滴,至培养基变为深红色,分装于大试管中,装量约为试管高度的1/2,1l5℃灭菌20min。细菌在此培养基中利用葡萄糖生长产酸,使酚红从红色变成黄色,在不同部位生长的细菌,可使培养基的相应部位颜色改变,但注意培养时间太长,酸可扩散以致不能正确判断结果。
  以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态,只需改变琼脂用量即可,前者为1.5%~2.0%,后者为0.3%~0.8%。
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