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PCR的衍生技术可以模拟生物体的合成
      
  PCR is the short for Polymerase Chain Reaction,中文是聚合酶链式反应,简单的说就是在体外模拟发生在细胞内的DNA快速扩增特定基因的技术.即属于DNA amplification中的主要方式.基本反应步骤我就不具体讲了 相信不是学生命工程专业的也不用去学,知道有3步就行,高温变性,annealing(这个中文我没有查到,大概意思就是降低反应温度,并把温度保持在55摄式度左右一分钟,叫低温去火)适温延伸. 这项技术主要应用在犯罪学,古生物学和研究人类起源等方面.近年来发现存在于原核生物基因组中的DNA片段,主要为重复基因外回文序列(repetitive extr-agenic palindromic,REP)和肠菌重复基因问基准序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)。这些短重复序列在细菌基因组中广泛分布并具有一定的保守性。利用其保守序列设计长度为15~22个碱基的引物,可扩增细菌基因组中位于重复序列之间的大小不同的DNA片段,通过琼脂糖电泳可得到重复性较好、具有种特异性或菌株特异性的DNA指纹图谱。REP-PcR指纹分析技术即是建立在上述几种短重复序列引物基础上的DNA指纹分析技术。
  许多研究者的工作表明,不同引物REP-PCR指纹分析结果之间在主要类群的划分上表现出较好的一致性,但对关系非常密切的菌株的聚类结果往往随引物不同而异。为消除这种差别,有些研究者将双引物或多引物.REP—PCR指纹分析数据合并在一起进行聚类分析,以增加菌株指纹图潜的特异性。
  单链构象多态性(single stranded conformation polymophism,SSCP)分析,是在PCR产物中加入高浓度的甲酰胺,并在80~90℃变性为单链,再行非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后银染或放射自显影,就可得到多态性的检测结果。此法的原理是由于正常序列与变异序列的单链构象不同,从而电泳的迁移率不同,因此能在电泳上分离区别。该法灵敏度极高,能鉴别一个碱基的差异。对于一个环境微生物区系来说,有许多不同的种群存在其中,如何应用某种特异的基因序列进行种群多态性的研究,没有理想的分离技术是做不到的。SSCP可将序列长度相同而碱基排列不同的片段区分开,这样不同种的环境微生物通过图谱显示出来。同时可进行切胶纯化直接测序,与GenBank上的已知序列比较,得到种特异的基因序列,达到分类的目的。
  总之,由于PCR技术可以快速特异地扩增任何期望的DNA片段和目的基因,因而在环境微生物的检测与鉴定中有重要的实际应用价值。但在实际应用中也存在一些问题,如极少量外源性DNA引起的污染可能导致假阳性出现;试验条件不当导致产物产生突变;引物设计及靶序列选择不当可能降低灵敏度和特异性等。尽管还存在着一定的问题,相信随着该技术的进一步普及、发展和完善,可以预料,今后PCR技术在环境微生物领域中的应用将进一步扩大,特别是在检测水体、土壤中的致病细菌、病毒及指示菌等方面发挥愈来愈大的作用。
  PCR的衍生技术可以模拟生物体的合成,用来测序,可以针对有病的基因,设计引物,制成疾病诊断试剂盒,还有可以针对微卫星序列,可以做亲子鉴定,加入荧光物质,直接做荧光pcr
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