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国内最早研究真菌毒素免疫检测方法
      
  真菌毒素卫生监控的立法即国家标准的建立由两方面组成:一是建立真菌毒素检测方法的国家规范,主要为真菌毒素允许量国家标准的建立和卫生防疫部门的执法、粮油食品和饲料贸易的货物品质分析以及对引起真菌毒素中毒的污染物进行病因分析提供技术手段。二是建立食品和饲料中真菌毒素的允许量国家标准。这类规范属于强制性执行的法规,制订过程中除了依据毒理实验的结果,还必需进行相当规模的毒素污染调查,以确保所订指标切合实际,与国家农业生产,食品、饲料供应的接受能力相符。黄曲霉毒素B1允许量国家标准的制订中就体现出这种矛盾。AFB1强剧毒性、强致癌性物质。单纯从毒理学的观念看待食品中的AFB1检出即视为有毒,但也只能根据普查的实际情况,暂时依照目前规定的规范执行。
  当然,国外也存在同样问题。1966年至1975年间,WHO/FA O就连续3次修订了食品中黄曲霉毒素最高允许量标准,将其从30ppb逐步降低至15ppb欧盟则规定从1998年起进口花生原料中的黄曲霉毒素限量由20μg/kg,花生制品由10μg/kg统一降至4μg/kg即时将对黄曲霉毒素超标的花生入口国自动关闭欧盟15国市场。这两类有关真菌毒素国家规范的制订工作中,建立检测方法的工作进展较快。国从1989年开始进行真菌毒素免疫检测方法国家规范的研究,至今已建立了黄曲霉毒素B1等7种真菌毒素的免疫检测方法,其中有些已经正式公布实施,有些在审批过程中,其它重要的真菌毒素也有化学法等检测手段。国内非临床检验试剂中,真菌毒素的检测首先引入了单克隆抗体免疫技术。发展还促进了对其它生物毒素的研究,如河豚鱼毒素免疫检测方法的建立。
  但是真菌毒素允许量国家标的制订仍然滞后。目前只有黄曲霉毒素B1M1脱氧雪腐镰刀菌烯醇、展青霉素等少数真菌毒素的允许量规范公布实施。一些真菌毒素虽然已列入规范制订计划,但遇到很大困难。有关管理部门对无法直接发生经济效益的项目资金投入十分有限。而体制改革以后,真菌毒素的污染普查工作中已很难无偿组织地方单位共同协作。由于尚有一些规范亟待建立,而且AFB1这样的非平安性规范也需要适时修订,所以有关真菌毒素立法的任务十分艰巨。真菌毒素的检测方法,主要是由各级各类卫生监督部门在执法过程中使用,如果相应的法规不配套,那么已经建立的真菌毒素检验方法也就失www.atcc360.com去了用武之地。;以下是国内几种真菌毒素检测方法的研究进展:1黄曲霉毒素B1黄曲霉毒素B1二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物。即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)前者为基本毒性结构,后者与致癌有关。
  国内最早研究真菌毒素免疫检测方法的中国医学科学院肿瘤研究所的孙宗棠,于1983年建立了AFB1单克隆抗体放射免疫测定方法。1992年,中国科学院上海细胞所李永镛和上海医科大学公共卫生学院殷芬、俞顺章等人合作建立了AFB1单克隆抗体的酶联免疫检测方法。中国预防医科院营养与食品卫生研究所和江苏微生物所也先后建立了AFB1多克隆抗体的酶联免疫测定方法。北京市营养源研究所路戈与中国医科院肿瘤研究所王德斌和卫生部食品卫生监督检验所计融等人合作于1994年建立了规范的AFB1单克隆抗体酶联免疫检测方法,该法已列为国家规范(GB/T5009.2219961985年以前,另有几种荧光色谱法列为国家规范(GB/T5009.231996;GB/T5009.241996其中薄层色谱法由卫生研究所和青岛商品检验局于1973年建立(GB/T5009.2219962T2毒素为剧毒(猪静注LD50=1.2mg/kg,具有明显的细胞毒,而且是体内蛋白质合成的抑制剂,有致畸性和致突变性。中毒后呕吐,腹泻,严重时损伤造血组织。
  T2毒素的免疫检测方法由卫生部食检所阳传和、罗雪云、计融于1991年建立(GB/T1493394方法最低检出量为1ng/ml敏感范围为41000ng/ml这是首次采用免疫技术建立的检测真菌毒素的国家规范。3脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素,DON较早(1970年)被分离提纯后命名的真菌毒素,毒性弱于T2毒素,小鼠经口LD50=9.2mg/kg中毒症状类似,有明显的致吐作用。DON经对甲基苯甲醛喷雾后呈黄色,卫生部食检所魏润蕴于1986年建立了DON薄层层析检测方法(GB/T14929.51994DON免疫检测方法由卫生部食检所阳传和、计融于1992年建立,方法最低检出量为5ng/ml敏感范围为51000ng/ml该法已批准为国家标准(GB/T14929.51994小麦、面粉、玉米及玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇限量规范已于1996年9月1日颁布实施(GB163291996最高允许量为1000μg/kg4二乙酰镳草镰刀菌烯醇(DA S毒性强于T2毒素(猪静注LD50=0.367mg/kg1992年,卫生部食检所李业鹏、罗雪云等用酶标志单克隆抗体建立了检测DA S双抗夹心酶免疫斑点检验方法,最低检出量为10ng/ml敏感范围为21000ng/ml5玉米赤霉烯酮(ZENF2另外一种从赤霉病麦中分离出来的真菌毒素(化学名称为610羟基-6氧基碳烯基)β-雷锁酸-μ-内酯,分子量为318主要污染小麦、大米、玉米、荞麦等谷物,一种生殖系统毒素,有强烈致畸作用。
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