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对于不同菌种的复苏及保存活化的方式
      
  菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养,逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物,即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程,因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同,所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境
  要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏的方式和方法。目前国际国内常用的菌种保存方法包括:定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃ 冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。
  对于不同的保存方式活化的方式也不同:
  1 定期移植法的菌种复苏较简单,直接转接即可;
  2 液体石蜡法保存的菌种在复苏时,挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上,生长繁殖后,再重新转接一次;
  3  沙土管法保存菌种在复苏时,在无菌条件下打开沙土管,取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上,长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中,增殖培养后再转接斜面;
  4  真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,将安瓿管顶部烧热, 用无菌棉签沾冷水,在顶部擦一圈,顶部出现裂纹,用挫刀或镊子颈部轻叩一下,敲下已开裂的安瓿管的顶端,用无菌水或培养液溶解菌块,使用无菌吸管移入新鲜培养基上,进行适温培养;
  5  -80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏时,从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管,应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止,约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养
  6  液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏相似,从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管,应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止,一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
  总结一下菌种活化需要以下几个步骤:第一配置菌种适宜生长的培养基,第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态,比如将冷冻的菌种解冻,第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养,此步骤称为菌种复壮,第四步挑选培养基茁壮的菌落,挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养,重复此步骤2-3次,从而得到生长良好的菌落,经过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的目的.
  复苏菌种前应准各适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备,所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。启开菌种宜采用锯开法(锯开前用70%酒精棉消毒菌种管外壁)。用吸管将液体培养基0.3ml左右注入被启开的菌种安瓶中并吹打,使安瓶中的冻干菌种溶解成菌悬液。 将上述菌悬液全部吸出,分别接种到固体斜面和液体培养管中,一般放置在37℃培养箱培养18~24小时。对需要特殊培养条件的细菌,如需5%~10%CO2或厌氧条件等,应分别于CO2培养箱或厌氧培养箱中培养。次日观察菌种的生长情况,如菌种未生长,应继续培养至72小时。复苏后的菌种在传1~2代后使用。暂不启开的安瓶及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。菌种保存相关文章:微生物实验用菌种如何保存的方法
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