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		如何用甘油保存菌种的基本要求方法

如何用甘油保存菌种的基本要求方法

　　1. 20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)

　　2. 将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管，4～6h增菌后，加入适量甘油一生理盐水保存液，-20℃冰箱保存；链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管，在5％～10％CO2中经8～10h增菌后，加入适量保存液，80℃低温冰箱保存；真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤，不做培养，加入保存液后，-20℃冰箱保存。结果在连续3年实验期内，各菌种保存效果良好，且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。结论使用甘油生理盐水保存法来保存菌种，各菌种保存时间长，方法简便，特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。

　　3. 常用的是终浓度 10-30% 的甘油。由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度 50% 的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。使用时按 50% 甘油:菌液 = 1:1 混合均匀，然后迅速冻结。

　　A. 先把甘油稀释成50%，然后灭菌这样20%的终浓度用400微的菌体加600微的50%甘油混合不就可以啦纯的甘油太粘稠啦，用枪不好吸的

　　B 终浓度15%。甘油配成80%的浓度，到时候加800微升菌体，200微升甘油就好。简单的就在原来的培养基，如LB，或生理盐水中加甘油，终浓度在20%左右，悬浮沉淀后装小管扔冰箱冻起来就可以了。但时间不能太长，不要超过2~3个月，时间长了要重新活化、筛选。

　　甘油和水是互溶的，根本不是什么密封作用！甘油是为了防止冷冻结晶破坏细胞

　　冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。?由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。?保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。?

　　该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。不适合酷友频繁的求助菌种。我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。-20摄氏度保存即可。我们的菌种有保存七八年的依然能用。方便快捷。

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