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阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质
  【编号】:GBW(E)100305

  【产品名称】:阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质

  【规格】:1.5mL;52.3 ng/μL(1.71×1010copies/μL)

  【用途】:

  阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质

  编号: GBW(E)100305
  规格: 1.5mL离心管
  标准值:52.3 ng/μL(1.71×1010copies/μL)
  不确定度:Urel=3.4%(k=2)
  一、样品制备
  在GenBank中搜索阪崎肠杆菌的大分子合成操纵子(MMS)基因序列;对上述序列进行分析,选择合适的序列和合适的酶切位点,并将酶切位点加至序列两端;将处理后的序列进行全基因人工合成,并将所得全长基因分别克隆至质粒载体pUC19中,构建获得包含目的基因序列的质粒DNA标准物质。利用大肠杆菌DH5α载体,复制生产,对目标质粒DNA进行提取纯化,经稀释分装得到质粒DNA样品。
  二、溯源性及定值方法
  本标准物质中质粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨电感耦合等离子体质谱法(HR-ICP-MS)进行定值。
  核酸分子含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键,其紫外可见吸收光谱在260 nm附近有一强的吸收峰,针对双链DNA,样品浓度和吸光值之间有以下关系:双链DNA样品浓度= OD260×核酸稀释倍数×50,其中OD260为核酸在260 nm处的吸光值。用超纯水做空白对照,通过测定其在260 nm处的吸光值可换算出质粒浓度。
  核酸分子中,每个碱基对应一个磷原子,根据公式:含磷量P%=碱基数*磷的原子量÷DNA分子量,即可计算出四个质粒DNA标准物质的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法检测标准物质样品中的磷元素含量,计算得到质粒DNA标准物质的含量。
  定值过程使用满足计量学特性要求的测量方法和计量器具,保证其溯源性。
  三、特性量值及不确定度
标准物质名称 标准值 相对扩展不确定度
k=2
阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质 [浓度] 3.40%
  保质期: 12个月
  来源:计量院
  类别:国标物、阪崎肠杆菌MMS基因
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